마우스 좌골 신경에서의 NAD+ 및 그 대사산물의 정량화
소개
니코틴아미드 아데닌 디뉴클레오티드(NAD+)의 중요한 부분과 노화 및 신경퇴행에 대한 대사산물은 널리 인식되어 왔습니다. 노화 및 신경퇴행성 질환을 대상으로 하는 생화학적 연구 및 개입을 향한 진전을 촉진하려면 NAD+ 구제 경로에서 NAD+와 그 대사산물 수준을 정확하게 정량화하는 것이 매우 중요합니다. 여기에서는 정상 및 손상된 마우스 좌골 신경에서 NAD+ 및 그 대사 산물 수준을 정량화하기 위해 강력하고 정확한 LC-MS/MS 방법이 적용됩니다.
NAD+ 및 그 대사산물을 정량화하는 기존 방법의 한계
HPLC-UV, NMR, 모세관 영역 전기영동 또는 비색 효소 분석과 같은 NAD+ 및 그 대사산물을 정량화하는 전통적인 방법은 감도, 선택성 및 간접 측정 측면에서 다양한 문제에 직면해 있습니다. 세포 또는 조직 NAD+ 및 그 대사산물 측정을 위한 기존 LC-MS/MS 분석의 경우 실행 시간 연장, 크로마토그래피 머무름 거동 불량, 불만족스러운 피크 모양 등 극복해야 할 어려움이 여전히 많습니다. 또한 NAD+ 구제 경로에서 1-3개의 물질만 이러한 방법으로 커버할 수 있습니다.
LC-MS/MS 분석법의 수정
기존 LC-MS/MS 분석을 기반으로 크로마토그래피 조건, 대리 매트릭스 및 MS/MS 조건에 대한 수정이 수행됩니다. 구체적으로, 5μM의 메틸렌 포스폰산이 이동상 첨가제로 사용되어 신호 강도와 피크 모양을 명시적으로 촉진합니다. Never 샘플의 상대적으로 깨끗하고 단순한 특성과 작은 크기를 감안할 때 초순수는 대체 매트릭스로 테스트됩니다. 친수성 상호작용 액체 크로마토그래피 컬럼 및 고탄수화물 컬럼 대신 Waters Atlantis Premier BEH C18 AX 컬럼을 사용하며, 고유한 MaxPeak HPS 고성능 표면 기술(컬럼 내벽 부동태화, 금속 표면 제거)을 통해 모든 분석물의 높은 재현성, 피크 대칭 및 베이스라인 분리가 가능합니다.또한 MS 조건은 이온 스프레이 전압의 경우 4000V, 터보 히터 온도의 경우 450°C, 가스 1의 경우 50psi, 가스 2의 경우 50psi, 커튼 가스의 경우 30psi, 충돌 가스의 경우 12psi로 cADPR 및 니코틴아미드 모노뉴클레오티드(NMN)의 응답을 유지하면서 cADPR(cyclic adenosine diphosphate ribose) 채널의 NAD+ 간섭 신호를 최소화하도록 최적화되어 있습니다.
신경 샘플의 대표적인 크로마토그램(정상 대 손상)
5가지 분석물 모두 기준선 분리를 달성하며, 여기서 cADPR은 신경변성 모델에서 민감한 바이오마커입니다. 여기서 좌골 신경 축삭 절개술은 축삭 변성을 유도하여 손상된 신경의 NAD+ 수치 감소 및 NMN 수치 상승을 초래하여 NMN/NAD+ 비율을 약 2배 증가시킵니다. 동시에 니코틴아미드(NAM)와 아데노신 이인산 리보스(ADPR) 수치는 약 2배 감소하는 반면 cADPR 수치는 8배 이상 증가합니다. 이러한 결과는 이전에 보고된 연구의 결과와 일치하며, NAD+ 및 그 대사산물을 정량화하는 데 있어 이 수정된 LS-MS/MS 방법의 정확성을 검증합니다.
결론
이 수정된 LC-MS/MS 방법은 5분의 짧은 런타임 내에 NAD+, NMN, NAM, ADPR 및 cADPR의 효과적인 베이스라인 분리를 가능하게 하여 다양한 신경 장애의 조기 진단과 노화 및 신경퇴행성 질환에 대한 약물 개발에 기여합니다.
참조
Ma Y, Deng L, Du Z. 생쥐 좌골 신경에서 NAD+ 및 관련 대사산물을 정량화하기 위한 LC-MS/MS 방법의 개발 및 검증 및 신경 손상 동물 모델에 적용. J 크로마토그리 A. 도이:10.1016/j.chroma.2024.464821
본택 나드
본택2012년부터 자체 소유 공장, 170개 이상의 글로벌 특허 및 강력한 R&D 팀을 통해 코엔자임 및 천연 제품의 원료 R&D, 제조 및 판매에 전념해 왔습니다. BONTAC은 생합성 분야에서 풍부한 R&D 경험과 첨단 기술을 보유하고 있습니다.NAD 및 그 전구체(예: NMN 및 NR). NAD ER 등급(내독신 제거), NAD 등급 I(IVD/건강 보조 식품/화장품 원료 분말), NAD 등급 II(API/중간체) 및 NAD 등급 IV(용해도에 대한 요구 사항이 더 높은 경우)를 포함하여 다양한 유형의 NAD를 선택할 수 있으며 동결건조 분말 또는 결정성 분말의 형태로 제공될 수 있습니다. BONTAC NAD의 순도는 98% 이상에 도달할 수 있습니다.
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