정량화: NAD+와 마우스 좌골 신경의 대사 산물

소개

니코틴아미드 아데닌 디뉴클레오티드(NAD+)의 중요한 부분과 노화 및 신경 퇴행에서 그 대사 산물은 널리 알려져 있습니다. 노화 및 신경퇴행성 질환을 표적으로 하는 생화학 연구 및 개입을 향한 진전을 촉진하기 위해서는 NAD+ 구제 경로에서 NAD+와 그 대사 산물 수준을 정확하게 정량화하는 것이 매우 중요합니다. 여기에서는 정상 및 손상된 마우스 좌골 신경에서 NAD+ 및 그 대사 산물 수준을 정량화하기 위해 강력하고 정확한 LC-MS/MS 방법이 적용됩니다.

NAD+ 및 그 대사 산물을 정량화하는 기존 방법의 한계

HPLC-UV, NMR, 모세관 영역 전기영동 또는 비색 효소 분석과 같은 NAD+ 및 그 대사 산물을 정량화하는 기존 방법은 감도, 선택성 및 간접 측정에서 다양한 문제에 직면해 있습니다. 세포 또는 조직 NAD+ 및 대사 산물 측정을 위한 기존 LC-MS/MS 분석과 관련하여, 긴 실행 시간, 불량한 크로마토그래피 머무름 거동, 만족스럽지 못한 피크 모양 등 극복해야 할 어려움이 여전히 많습니다. 또한 NAD+ 회수 경로에 있는 1-3개의 물질만 이러한 방법으로 다룰 수 있습니다.

LC-MS/MS 방법의 수정

기존 LC-MS/MS 분석을 기반으로 크로마토그래피 조건, 대리 매트릭스 및 MS/MS 조건에 대한 수정이 수행됩니다. 구체적으로, 5μM의 메틸렌 포스폰산이 이동상 첨가제로 사용되어 신호 강도와 피크 모양을 명시적으로 촉진합니다. Never 샘플의 비교적 깨끗하고 단순한 특성과 작은 크기를 감안할 때 초순수는 대체 매트릭스로 테스트됩니다. 친수성 상호 작용 액체 크로마토그래피 컬럼 및 고탄수화물 컬럼 대신, 고유한 MaxPeak HPS 고성능 표면 기술(컬럼 내벽 부동태화, 금속 표면 제거)을 통해 모든 분석물질의 높은 재현성, 피크 대칭성 및 베이스라인 분리를 가능하게 하는 Waters Atlantis Premier BEH C18 AX 컬럼이 사용됩니다.또한, MS 조건은 cADPR(cyclic adenosine diphosphate ribose) 채널의 NAD+ 간섭 신호를 최소화하는 동시에 이온 스프레이 전압의 경우 4000V, 터보 히터 온도의 경우 450°C, 가스 1의 경우 50psi, 가스 2의 경우 50psi, 커튼 가스의 경우 30psi, 충돌 가스의 경우 12psi로 cADPR 및 니코틴아미드 모노뉴클레오티드(NMN)의 반응을 유지하도록 최적화되었습니다.

신경 샘플의 대표 크로마토그램(정상 vs 부상)

5가지 분석물 모두 baseline separation을 달성하며, 여기서 cADPR은 신경퇴행 모델에서 민감한 바이오마커입니다. 여기서, 좌골 신경 축삭 절개술은 축삭 변성을 유도하여 손상된 신경의 NAD+ 수치를 감소시키고 NMN 수치를 상승시켜 NMN/NAD+ 비율을 약 2배 증가시킵니다. 동시에 니코틴아미드(NAM) 및 아데노신 이인산 리보오스(ADPR) 수치는 약 2배 감소하는 반면 cADPR 수치는 8배 이상 증가합니다. 이러한 결과는 이전에 보고된 연구의 결과와 일치하며, NAD+ 및 그 대사 산물을 정량화하는 데 있어 이 수정된 LS-MS/MS 방법의 정확성을 입증합니다.

결론

이 변형된 LC-MS/MS 분석법은 5분이라는 짧은 시간 내에 NAD+, NMN, NAM, ADPR 및 cADPR의 효과적인 baseline 분리를 가능하게 하며, 이는 다양한 신경 장애의 조기 진단 및 노화 및 신경 퇴행성 질환에 대한 약물 개발에 기여합니다.

참조

Ma Y, Deng L, Du Z. 쥐 좌골 신경에서 NAD+ 및 관련 대사 산물을 정량화하기 위한 LC-MS/MS 방법의 개발 및 검증 및 신경 손상 동물 모델에 대한 적용. J 크로마토그르 A. 도이:10.1016/j.chroma.2024.464821

본탁 나드

본탁 2012년부터 코엔자임 및 천연 제품의 원료의 R&D, 제조 및 판매에 전념해 왔으며, 자체 소유 공장, 170개 이상의 글로벌 특허 및 강력한 R&D 팀을 보유하고 있습니다. BONTAC은 생합성 분야에서 풍부한 R&D 경험과 첨단 기술을 보유하고 있습니다. NAD 및 그 전구체 (예: NMN 및 NR)에 있습니다. NAD ER 등급 (내독소 제거), NAD 등급 I (IVD /식이 보충제 / 화장품 원료 분말), NAD 등급 II (API / 중간체) 및 NAD 등급 IV (용해도에 대한 더 높은 요구 사항이있는 경우)를 포함하여 다양한 유형의 NAD를 선택할 수 있으며, 이는 동결 건조 분말 또는 결정성 분말의 형태로 제공 될 수 있습니다. BONTAC NAD의 순도는 98% 이상에 이릅니다.

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