생물학적 샘플에서 NMN을 정량화하는 과학적 방법
1. 소개
보충니코틴아미드 모노뉴클레오티드(NMN)니코틴아미드 아데닌 디뉴클레오티드(NAD+)의 수치를 상향 조절하기 위해 유망한 노화 방지 개입으로 밝혀졌습니다. 그러나 NAD+ 중간체를 정확하게 정량화하는 것은 여전히 심각한 과제이며,NMN특히. 이 연구는 정확한 정량화를 위해 새로운 방법인 이중 동위원소 매개 LC-MS/MS 방법론(dimeLC-MS/MS)을 도입하기 위해 힘을 실어줍니다.NMN생물학적 샘플에서.
2. NMN의 정확한 검출에 영향을 미치는 요인
NMN은 효소 분해에 대한 취약성, 시료 처리의 전환, 다양한 컬럼 및 추출 조건에서의 복잡한 거동, 매트릭스 효과로 인해 정확하게 검출하기 어렵습니다.
구체적으로 NMN은 극성이 높고 휘발성이 낮아 물에는 용해되기 쉽지만 유기용매에는 용해되기 어렵습니다. 이러한 특성은 기존의 많은 정량 분석 방법의 적용을 크게 제한합니다.
B생물학적 샘플같은혈액은 CD38 및 CD73(ecto-5’-뉴클레오티다아제), 둘 다 NMN을 기질로 사용할 수 있습니다.
컬럼에서 NMN의 거동은 아마도 전하의 이분성 특성으로 인해 매우 복잡하므로 추출 및 컬럼 조건의 미묘한 차이가 NMN의 신뢰할 수 있고 정확한 검출에 큰 영향을 미칩니다.
3. 대처 전략다이메LC-MS/MS임팩트 팩터의 영향을 줄이기 위해
위에서 언급한 요인의 간섭을 피하기 위해 프로토타입 컬럼 NMN-2가 적용됩니다. 이 컬럼에는 탄소 입자보다 친수성 화합물에 더 많이 결합할 수 있는 C18 기반 고순도 실리카 입자가 포함되어 있어 분리 능력이 향상됩니다.
과염소산(PCA)은 혈장과 같은 생물학적 시료에서 손실을 최소화하면서 NAD+와 NMN을 효율적으로 추출할 수 있기 때문에 사용됩니다.
매트릭스 효과를 조정하기 위해 PCA 추출 전에 고정량(1μM)의 각 동위원소 화합물을 생물학적 샘플에 첨가합니다.
4. 장점sdimeLC-MS/MS의
LC-MS/MS 기반 방법론의 이중 동위원소 NMN 표준물질인 NMN(M + 14) 및 NMN(M + 5)은 샘플 처리 중 NMN의 운명을 정확하게 추적할 수 있어 생물학적 샘플에서 NMN 측정의 정확성과 신뢰성을 크게 높일 수 있습니다. 게다가 dimeLC-MS/MS는 다양한 유형의 생물학적 샘플에서 NMN의 추출 효율과 절대 농도를 평가할 수 있습니다.
5. 결론
일입니다.새로운 LC-MS/MS-이중 동위원소 NMN 표준물질을 사용한 구동 방법론은 생물학적 샘플에서 NMN을 정확하고 안정적으로 측정할 수 있습니다.향후 NMN 섭취에 대한 연구에 활용될 수 있습니다.
6. 참고
Unno, Junya et al. "이중 동위원소 매개 액체 크로마토그래피-탠덤 질량 분석법(dimeLC-MS/MS)에 의한 생물학적 샘플에서 니코틴아미드 모노뉴클레오티드의 절대 정량화." npj 에이징 vol. 10,1 2. 2024년 1월 2일, doi:10.1038/s41514-023-00133-1
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